一、 标志物介绍

法国肿瘤学家 Dr. Bohuon 的团队在使用放射免疫法检测甲状腺肿瘤患者降钙素（CT）水平的时候发现降钙素原（PCT）的存在。降钙素原（procalcitonin, PCT）是一种糖蛋白，是降钙素（calcitonin, CT）前肽物质。PCT由116个氨基酸组成。血清PCT来自第11号染色体上的单拷贝基因，该基因由2800个碱基对组成，含6个外显子和5个内含子。转录后，在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网翻译成降钙素原前体，包括N端84个氨基酸、活性降钙素和降钙蛋白三部分。降钙素原前体在内源多肽酶作用下剪掉nPro-CT端单一序列，生成116个氨基酸的PCT（其中60-91位氨基酸序列和CT氨基酸序列相同），分子量约为13KD，能在正常人血清中游离出来。PCT不具激素活性，经由酶切作用可在体内产生CT，从而产生生物学功能^[1]。

图1 PCT结构

二、PCT临床诊断意义

PCT 作为一种敏感的炎症标志物，用于指导感染性疾病的治疗时，可有效缩短抗菌药物使用时间，减少抗菌药物的使用量，在指导临床抗菌药物的合理使用方面展现出了巨大的潜力。研究显示，机体在出现严重全身性细菌感染、真菌感染、寄生虫感染时，PCT会迅速上升，并且感染发生的严重程度、患者预后与PCT水平上升的幅度有关^[2]。

表1 导致PCT异常的常见疾病或生理状态

PCT的生物学效应目前尚无明确结论，但次级炎症因子的作用、趋化因子的作用、抗炎和保护作用可作为其主要生物学效应[3]。健康人的血浆PCT质量浓度低于0.05ng/ml。老年人、慢性疾病患者、以及不足10%的健康人血浆PCT质量浓度高于0.05ng/ml，最高可达0.1ng/ml，但一般不超过0.3ng/ml。脓毒症患者PCT的诊断界值为超过0.5ng/ml，严重脓毒症和脓毒性休克患者PCT质量浓度波动在5-500ng/ml。极少数严重感染患者血浆PCT水平超过1000ng/ml^[3]。

表2 对于PCT结果判读的建议

目前，PCT可通过半定量和定量方法检测。半定量方法主要是胶体金标志检验，定量方法包括放射免疫分析法，免疫荧光法，双抗夹心免疫化学发光法，酶免法等。PCT在血样中非常稳定，采血后室温放置24h，PCT质量浓度仅下降12%左右，若在4℃保存仅下降6%。冰冻、抗凝剂、血清或者血浆、动脉血或者静脉血对检测结果的影响均微乎其微。如果需要长时间存放后检测，则需要低温或者冰冻保存血样^[4]。

在常规检测中，约2/3样品的PCT含量都很低。恰恰是这些样品包含了很多需要鉴别真阳性或假阳性的情况，因而更需要临床实验室提供准确的结果。尽管很多产品声称其在全线性范围内与B.R.A.H.M.S PCT产品具有可比性，但这些产品往往在低浓度水平偏差巨大，导致大量的假阳性、假阴性结果，为临床判读带来风险。

综上，对于试剂厂家来说只有提供高性能的PCT产品（特别是精密度和灵敏度等），才能满足临床应用中的质量要求。为此，针对试剂盒开发的需求，博岳生物提供了高质量的抗体为广大厂家助力。

三、博岳降钙素原抗体

3.1 配对抗体推荐

针对降钙素原检测，博岳生物推出如下几种PCT单克隆抗体，另外还提供对应的PCT重组抗原。其中抗体配对推荐如下：

表3  用于免疫检测系统开发的配对推荐

3.2 PCT抗体性能分析

以化学发光平台为例，博岳内部实验室挑选了一对PCT单克隆抗体进行试剂性能分析，其中捕获抗体选择PCT101，标记抗体选择PCT102。结果显示该配对原料在化学发光平台上表现良好，其中低值端精密度≤4.6%，线性范围为0.05-100ng/ml，最低检出限LOB为0.007ng/ml，同时98例的临床样本比对显示与罗氏试剂盒（cobas 411）之间存在良好的相关性（R²=0.9767），特别是73例低值端（≤1ng/ml）样本同样展现出与罗氏试剂盒良好的相关性（R²=0.9440）。

此外，实验室使用PCT106包被，PCT101标记的配对组合，也显示出同样的高性能。

（1）精密度测试

取5例低值临床样本，使用自研试剂盒测试15次，分析显示低值端精密度良好 （CV≤4.6%）。结果见图2。

图2 PCT精密度测试

（2）线性范围

取1例高值临床样本，由Roche试剂盒（cobas 411）测试确定浓度后，按比例连续稀释成一系列梯度测试，对样本理论浓度和测试浓度做回归分析，分析显示，在0.05-100ng/ml范围内，线性相关系数R²＞0.99。见图3。

图3 PCT线性范围

（3）与罗氏试剂相关性

取98例临床样本，分别使用自研试剂盒和Roche试剂盒（cobas 411）测试，对两试剂盒测试浓度做线性回归分析，分析显示两试剂呈显著相关（R²=0.9767）。见图4。

图4 PCT临床比对结果（N=98）

（4）低值端样本与罗氏试剂的一致性

取73例低值端临床样本，使用Roche试剂盒（cobas 411）和自研试剂盒平行检测，对两试剂盒测试浓度做线性回归分析，分析显示两试剂呈显著相关（R²=0.9440）。见图5。

图5  PCT低值样本一致性对比（N=73）

（5）PCT试剂灵敏度

按EP17-A文件测试自研试剂灵敏度（LOB=0.007ng/mL，LOD=0.014 ng/mL，LOQ=0.017 ng/mL）。

图6  PCT试剂灵敏度

参考文献

[1]方漉. 血清降钙素原检测在儿科感染性疾病中的应用分析[J]. 基层医学论坛, 2013, 17(25):2.

[2]施永新, 宋卫青, 李化会. 血清降钙素原与内毒素对医院获得性肺炎病原诊断和疗效的判断价值[J]. 中国感染控制杂志, 2016, 15(001):41-44.

[3]降钙素原急诊临床应用专家共识组. 降钙素原(PCT)急诊临床应用的专家共识[J]. 中华急诊医学杂志, 2012, 21(9):8.

[4] Meisner M,Tschaikowsky K,Schnabel S,etal.Procalcitonin--influence of temperature, storage, anticoagulation and arterial or venous asservation of blood samples on procalcitonin concentrations.[J]. European Journal of Clinical Chemistry & Clinical Biochemistry Journal of the Forum of European Clinical Chemistry Societies, 1997, 35(8):597-602.