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Bioeast磁性微球与CEA配对抗体在化学发光平台的应用解决方案

磁微粒化学发光免疫分析是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合的分析方法。磁微粒作为载体偶联抗体或抗原,可捕获目标分子,因其具有超顺磁性可实现多次磁分离,有利于仪器的全自动化并加快检测速度。目前,磁微粒化学免疫分析技术因其灵敏度高、检测范围宽、自动化程度高等优点已被广泛应用于生物医学检测领域。

磁微粒化学发光-夹心法检测示意图

癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是1965年由Gold和Freedman首先从结肠癌和胚胎组织中提取的一种肿瘤相关抗原,是一种具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白。CEA广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌,能反映出多种肿瘤的存在,对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一种较好的肿瘤标志物。

Bioeast对甲苯磺酰基磁性微球对比同类进口产品(CEA检测)

同条件下,博岳3批次M3000T磁球与进口品牌D 2.8μm tosyl磁珠在CEA磁微粒化学发光检测试剂中的对比:



结论:

1.博岳生物M3000T对甲苯磺酰基磁性微球在CEA检测中信号值高于进口品牌

2.磁性微球生产工艺稳定,三批磁性微球的批间差小

使用Bioeast M3000T磁性微球开发癌胚抗原(CEA)检测试剂

材料


* 磁性微球:博岳M3000T磁性微球

* 磁性微球偶联抗体:博岳CEA101抗体

* 碱性磷酸酶标记抗体:博岳CEA102抗体

* 检测标志物:博岳CEA301,用于制备不同浓度样品

设备


* 磁性微球包被过程中使用涡旋混匀仪、旋转混运器、磁分离架

* 检测过程中使用i2900全自动化学发光免疫分析仪

检测流程


* 将样品、CEA抗体偶联的M3000T磁性微球混合,孵育,清洗;

* 加入碱性磷酸酶标记的CEA抗体,孵育,清洗;

* 加入发光底物,测定信号值。

检测结果


发光值检测

测试CEA 校准样品(Cal.1~Cal.6),比较不同抗体偶联量下检测性能的差异。每个点样品三次重复测试取平均值,观察发光值趋势(图1)。


图 1 不同抗体偶联量在检测CEA时的发光值差异



发光值(RLU)与样品浓度值呈正相关。随着抗体偶联量的增加,整体发光值呈上升趋势,偶联量在20μg/mg~40μg/mL时发光值达到平台期。

信噪比

使用CEA 低值校准(Cal.2)与零值校准(Cal.1)比值评估信噪比,以初步判断检测灵敏度(图2)。


图 2 不同抗体偶联量信噪比差异



抗体偶联量越多,整体发光值越高,但是当偶联量达到30μg/mg时零值校准(Cal.1)检测发光值出现升高,导致信噪比有所降低。

精密度

选取15μg/mg、20μg/mg和30μg/mg三种偶联量磁性微球,对CEA血清样品进行检测:低值样品(约4.79ng/mL)、中值样品(约112.10ng/mL)、高值样品(约592.70ng/mL),每个样品重复检测10次,计算变异系数CV%(图3)。


图 3 不同抗体偶联量精密性差异



各偶联量下变异系数CV%均小于4.0%,抗体偶联量与检测精密性变化无显著相关趋势。

血清样品检测

综上,选定20μg/mg偶联量磁性微球,测试浓度范围在0.58ng/mL~592.7ng/mL的170份样品,以比较与Roche检测值的相关性。


图 4 血清样本检测相关性



相关系数r=0.9927,相关性良好。

加速稳定性

选取20μg/mg偶联量磁性微球,分3份(T1~T3),T1于4℃条件下储存7天,T2在37℃条件下储存3天,T3在37℃条件下储存7天,评估加速稳定性模拟磁性微球老化过程。

分别以T2和T3检测发光值与T1磁性微球检测发光值相比(RLUsn/RLU4),观察稳定性变化(如图5)。


图 5 37℃加速稳定性发光值与4℃对比(4℃为100%)



各浓度样品37℃储存后最大信号值差异<5.0%,稳定性良好。

结论


根据发光值检测和信噪比结果,我们推荐每毫克磁性微球偶联抗体20~30μg。我们建议在您的应用中,尝试不同抗体偶联比例,以获得最优条件。

根据精密度测定结果,不同偶联量,高中低样品检测变异系数(CV%)均<4.0%,证明偶联磁性微球具有良好的精密性。

根据加速稳定性结果,37℃储存后最大信号值差异<5.0%,证明偶联磁性微球具有良好的稳定性。我们建议在您的应用中,尝试不同保存液以更好的提高磁性微球的稳定性。

相关性结果表明,以Bioeast磁性微球+配对抗体的方案进行临床样本的检测,与Roche检测结果具有良好的相关性。

以上仅为本实验室内应用实例结果,我们建议在您的应用过程中,尝试不同活性基团、不同粒径的磁性微球以及不同的偶联方案,以确保选出最佳的开发条件。


博岳磁性微球系列



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